当研究室で駆使する実験操作・研究手法　
〜細胞工学と遺伝子工学の併用〜

---

正常ヒト細胞（血管・脳神経・皮膚、癌細胞）やヒト皮膚組織片の培養
・・・一般的な微生物や植物の培養よりは、技術修得の価値が大きい
↓
培養細胞へのbcl-2遺伝子の導入や抗酸化因子の投与
・・・プラスミドＤＮＡ調製・遺伝子組換えなど
↓

細胞死・ＤＮＡ傷害・細胞膜傷害の増減を調べる
・・・バイオ機器（共焦点レーザー顕微鏡、蛍光プレートリーダー，
カイネティック吸光リーダー，フローサイトメトリー，
コールターチャネライザーなど）で分析
↓

細胞死の増減と相関する分子／遺伝子レベルの要因を調べる

【細胞死を増減させる遺伝子(p53,bcl-2など) 発現度】
−−ウエスタン・ブロット，免疫ステイン，ノーザン・ブロット

【テロメア長，テロメア伸長酵素の活性】
−−ＤＮＡ抽出、ＰＣＲ遺伝子増幅，ｉｎ　ｓｉｔｕ−ＰＣＲ，サザンブロットなど

【細胞内フリ−ラジカルの消長】
−−電子スピン共鳴，レドックス蛍光色素法，フローサイトメトリ−装置

【転写因子・細胞内シグナル伝達因子の活性化度】
−−ＤＮＡプローブ，ＤＮＡ標識，ゲルシフト法，免疫沈降法

【組織レベルの画像解析】
電子顕微鏡、特定型コラーゲン・エラスチン染色、組織内DNA鎖切断の検出

より強力な細胞死コントロール（人為的制御）技術を目指す
−−−老化・生活習慣病の防御では細胞死抑制
ガン防御では細胞死促進